Kính hiển vi đồng tiêu

Trường nhìn của kính hiển vi bị giới hạn bởi quang học hình học và bởi khả năng thiết kế quang học cung cấp hiệu chỉnh quang sai liên tục trên một trường nhìn lớn. Nếu sử dụng bố trí quét, vật kính có thể được sử dụng trên một loạt trường nhỏ liên tục và kết quả được sử dụng để xây dựng hình ảnh của một vùng lớn hơn.

Khái niệm này đã được khai thác trong kính hiển vi quét đồng tiêu. Tính năng chính của kính hiển vi đồng tiêu là chỉ những gì được lấy nét được phát hiện và mọi thứ nằm ngoài tiêu điểm sẽ xuất hiện dưới dạng màu đen. Điều này đạt được bằng cách tập trung các ánh sáng nguồn, thường là một tia laser , đến một điểm và phát hiện hình ảnh thông qua một lỗ kim. Vì chỉ có ánh sáng từ điểm hội tụ mới góp phần tạo nên hình ảnh cuối cùng trong hệ thống đồng tiêu, nên nó đặc biệt hữu ích cho việc loại bỏ các cấu trúc nhỏ và ba chiều của các mẫu vật sinh học.

Trong một kính hiển vi đồng tiêu quét laze (LSCM), tiêu điểm của tia laze được quét qua một mẫu vật để tạo nên phần quang học hai chiều. Hình ảnh ba chiều có thể được tái tạo bằng cách chụp một loạt hình ảnh hai chiều ở các độ sâu tiêu cự khác nhau trong mẫu vật (được gọi là chuỗi Z). Các laser argon và krypton / argon thường được sử dụng, và một hệ thống đa photon đã được thiết kế trong đó laser argon kích thích một titan-sapphire tổng hợp . Do đó có thể sử dụng một loạt các màu sắc.
Các mẫu vật được phân biệt bằng huỳnh quang . Một số thành phần phát huỳnh quang một cách tự phát, nhưng hầu hết được nhuộm bằng thuốc nhuộm phát huỳnh quang dưới tia từ tia laser. Tốc độ quét có thể cao — trong một số hệ thống, một dòng hình ảnh được quét sau mỗi 0,488 mili giây (một phần nghìn giây bằng một phần nghìn giây) - vì vậy có thể dễ dàng lắp ráp một chuỗi hình ảnh cho thấy một mẫu vật thay đổi theo thời gian. Các phương pháp như thế này được sử dụng để nghiên cứu hành vi của các tế bào sống.